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| 24.09.2025 | |||
| 18:30 | Zbrojovka Brno | 2-1 | FK Teplice |
| 18:00 | Usti nad Labem | 0-2 | FK Zlin |
| 16:00 | Ceske Budejovice | 2-3 | Banik Ostrava |
| 16:00 | FC Hlinsko | 0-2 | FK Jablonec |
| 16:00 | FK Nové Sady | 3-2 | Sigma Olomouc |
| 16:00 | Jiskra Domazlice | 1-4 | Bohemians 1905 |
| 16:00 | MFK Frydek-Mistek | 1-2 AET | FK Pardubice |
| 16:00 | Petrin Plzen | 1-4 | Mlada Boleslav |
| 16:00 | Slavia Karlovy Vary | 0-5 | Sparta Praha |
| 23.09.2025 | |||
| 17:30 | Taborsko | 1-6 | MFK Karviná |
| 16:00 | FK Horní Ředice | 1-2 | Slovacko |
| 16:00 | Sokol Brozany | 0-2 | Slavia Praha |
| 16.09.2025 | |||
| 16:00 | TJ Sokol Lanzhot | 1-6 | Viktoria Plzen |